更新時(shí)間:2023-10-26
TG1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50菌株一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
TG1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
TG1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
TG1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
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大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat lymphocyte factor ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒廠家 大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
大鼠磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒廠家 大鼠磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
大鼠網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat omentin ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒廠家 大鼠網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒廠家 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat transforming growth factorsβ2,TGFβ2 ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒廠家 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
TG1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50 大鼠β羥丁酸(βOHB)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠β羥丁酸(βOHB)ELISA試劑盒廠家 大鼠β羥丁酸(βOHB)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)
大鼠白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)得到廣大客戶 :英文名稱; Rat ;