更新時(shí)間:2023-10-26
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 菌株一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
MN 人變腎上腺素 規(guī)格: 48T/96T
flagellin 人鞭毛蛋白 規(guī)格: 48T/96T
PY 人吡啶交聯(lián)物 規(guī)格: 48T/96T
PYD 人吡啶酚 規(guī)格: 48T/96T
NPC 人鼻咽癌 規(guī)格: 48T/96T
NP 人/苯丙酸去 規(guī)格: 48T/96T
LPA 人苯 規(guī)格: 48T/96T
BJP 人本周蛋白 規(guī)格: 48T/96T
cPLA2 人胞漿型磷脂酶A2 規(guī)格: 48T/96T
CIg 人胞漿免疫球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
人包蟲抗體IgG ELISA Kit,48T/96T 人包蟲抗體IgG ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
BTA 人膀胱腫瘤抗原 規(guī)格: 48T/96T
UBC 人膀胱癌抗原 規(guī)格: 48T/96T
CPN10 人伴侶蛋白10 規(guī)格: 48T/96T
Cys-C 人半蛋白酶抑制劑/胱抑素C 規(guī)格: 48T/96T
CP 人瘢痕性天皰瘡抗體 規(guī)格: 48T/96T
PT 人百日咳毒素 規(guī)格: 48T/96T
LIFR 人白血病抑制因子受體 規(guī)格: 48T/96T
ALCAM 人白細(xì)胞活化黏附因子 規(guī)格: 48T/96T
LCA/CD45 人白細(xì)胞共同抗原 規(guī)格: 48T/96T
CD4 人白細(xì)胞分化抗原4 規(guī)格: 48T/96T
CD30 人白細(xì)胞分化抗原30 規(guī)格: 48T/96T
LR 人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素 規(guī)格: 48T/96T
SLPI 人白細(xì)胞蛋白酶抑制因子 規(guī)格: 48T/96T
HLE 人白細(xì)胞彈性蛋白酶 規(guī)格: 48T/96T
C.albicans 人白色念珠菌 規(guī)格: 48T/96T
LTE4 人白三烯E4 規(guī)格: 48T/96T
LTD4 人白三烯D4 規(guī)格: 48T/96T
LTC4 人白三烯C4 規(guī)格: 48T/96T
LTB4 人白三烯B4 規(guī)格: 48T/96T
IRAK 人白介素受體相關(guān)激酶 規(guī)格: 48T/96T
IL-5 人白介素-5 規(guī)格: 48T/96T
IL-4 人白介素4 規(guī)格: 48T/96T
IL-3 人白介素3 規(guī)格: 48T/96T
IL-2R 人白介素2受體 規(guī)格: 48T/96T
IL-2sRβ 人白介素2可溶性受體β鏈 規(guī)格: 48T/96T
IL-2sRα 人白介素2可溶性受體α鏈 規(guī)格: 48T/96T
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? IL-27 人白介素27 規(guī)格: 48T/96T
IL-23 人白介素23 規(guī)格: 48T/96T
IL-2 人白介素2 規(guī)格: 48T/96T
IL1Ra 人白介素1受體拮抗劑 規(guī)格: 48T/96T