更新時(shí)間:2023-10-26
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 菌株一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 操作方法(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
MP-Ab 人肺炎支原體抗體 規(guī)格: 48T/96T
Cpn-Ab 人肺炎衣原體抗體 規(guī)格: 48T/96T
PARC/CCL18 人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子 規(guī)格: 48T/96T
SP-D 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D 規(guī)格: 48T/96T
SP-C 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C 規(guī)格: 48T/96T
SP-B 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B 規(guī)格: 48T/96T
SP-A 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A 規(guī)格: 48T/96T
人肺癌標(biāo)志物ELISA Kit,48T/96T 人肺癌標(biāo)志物ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
DR-70TM 人肺癌標(biāo)志物DR-70 規(guī)格: 48T/96T
LTA 人非小細(xì)胞肺癌抗原 規(guī)格: 48T/96T
NNE 人非神經(jīng)元性烯醇化酶 規(guī)格: 48T/96T
NON 人非甲基化寡核苷酸 規(guī)格: 48T/96T
AhR 人芳香烴受體 規(guī)格: 48T/96T
E1/UBAE 人泛素激活酶 規(guī)格: 48T/96T
Ub 人泛素蛋白 規(guī)格: 48T/96T
rT3 人反*狀腺原氨酸 規(guī)格: 48T/96T
DNM2 人發(fā)動(dòng)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
DPPⅣ 人二肽基肽酶Ⅳ 規(guī)格: 48T/96T
人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4 規(guī)格: 48T/96T
SLC/CCL21 人二級(jí)淋巴組織趨化因子 規(guī)格: 48T/96T
DAO 人二胺氧化酶 規(guī)格: 48T/96T
CA 人兒茶酚胺 規(guī)格: 48T/96T
PMN Elastase 人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶 規(guī)格: 48T/96T
PMN Elastase 人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶 規(guī)格: 48T/96T
PTN 人多效生長(zhǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
PTN 人多效生長(zhǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
poly-IgR 人多免疫球蛋白受體 規(guī)格: 48T/96T
PHSA 人多聚血清蛋白 規(guī)格: 48T/96T
PARP 人多聚ADP核糖聚合酶 規(guī)格: 48T/96T
DDC 人多巴胺脫羧酶 規(guī)格: 48T/96T
DBH 人多巴胺-β羥化酶 規(guī)格: 48T/96T
D2R 人多巴胺D2受體 規(guī)格: 48T/96T
D1R 人多巴胺D1受體 規(guī)格: 48T/96T
D1R 人多巴胺D1受體 規(guī)格: 48T/96T
DA 人多巴胺 規(guī)格: 48T/96T
PON 人對(duì)氧磷酶 規(guī)格: 48T/96T
PABA 人對(duì)氨基苯甲酸 規(guī)格: 48T/96T
Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? TE 人端粒酶 規(guī)格: 48T/96T
TSST-1 人毒性休克綜合征毒素1 規(guī)格: 48T/96T
HDV IgM 人丁型肝炎IgM 規(guī)格: 48T/96T