更新時間:2023-10-26
NMY51 感受態(tài)細胞100ul*50菌株一種常用于質(zhì)??寺〉木辍F洇?0lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)a互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
NMY51 感受態(tài)細胞100ul*50操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
NMY51 感受態(tài)細胞100ul*502 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達,使菌體復(fù)蘇。
NMY51 感受態(tài)細胞100ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項
1. 感受態(tài)細胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時,應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
Gzms-B 人顆粒酶B 規(guī)格: 48T/96T
Gzms-A 人顆粒酶A 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgM 人柯薩奇病毒IgM 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgG 人柯薩奇病毒IgG 規(guī)格: 48T/96T
AHA 人抗組蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
H2A-H2B 人抗組蛋白 規(guī)格: 48T/96T
EMAb 人抗子宮內(nèi)膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
ATA 人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACA/CENP 人抗著絲點抗體 規(guī)格: 48T/96T
ANGA 人抗中性粒細胞顆??贵w 規(guī)格: 48T/96T
ANA 人抗中性粒細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
pANCA 人抗中性粒細胞核周抗體 規(guī)格: 48T/96T
cANCA 人抗中性粒細胞胞漿抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACA 人抗中性粒/中心體抗體 規(guī)格: 48T/96T
PCNA 人抗增殖細胞核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
Apo A1 人抗載脂蛋白抗體A1 規(guī)格: 48T/96T
TAP 人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白 規(guī)格: 48T/96T
SCL70/topoⅠ 人抗硬皮病抗體70 規(guī)格: 48T/96T
HBcAb 人抗乙型肝炎病毒核心抗體 規(guī)格: 48T/96T
HBcAb-IgM 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體 規(guī)格: 48T/96T
HBcAb-IgG 人抗乙型肝炎病毒核心IgG抗體 規(guī)格: 48T/96T
HBsAb 人抗乙型肝炎病毒表面抗體 規(guī)格: 48T/96T
HBeAb 人抗乙型肝炎病毒e抗體 規(guī)格: 48T/96T
AIRA 人抗胰島素受體抗體 規(guī)格: 48T/96T
AT 人抗 規(guī)格: 48T/96T
EMAb 人抗眼肌抗體 規(guī)格: 48T/96T
EMAb 人抗眼肌抗體 規(guī)格: 48T/96T
PA-IgG/M/A 人抗血小板抗體IgG/M/A 規(guī)格: 48T/96T
ATG 人抗胸腺細胞球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
SRP 人抗信號識別顆粒抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACA-IgM 人抗心磷脂抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
ACA-IgG 人抗心磷脂抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
ACA-IgA 人抗心磷脂抗體IgA 規(guī)格: 48T/96T
AMA 人抗心肌抗體 規(guī)格: 48T/96T
snRNP/Sm 人抗小核糖核蛋白/Sm抗體 規(guī)格: 48T/96T
AMA 人抗線粒體抗體 規(guī)格: 48T/96T
cmDNA 人抗細胞膜DNA抗體 規(guī)格: 48T/96T
NMY51 感受態(tài)細胞100ul*50AGPA/PCA 人抗胃壁細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
ARA 人抗網(wǎng)硬蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
SDA 人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體 規(guī)格: 48T/96T